BL21(DE3)化學感受態細胞
目錄號：RTX304
儲存條件：-70℃凍存六個月
產品包裝：
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貨號
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RTX304-04
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BL21（DE3）
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50×100ml
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Competent
cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)
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10μl
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產品簡介：
本公司生產的BL21(DE3)感受態細胞采用經特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg，-70℃保存幾個月轉化效率不發生改變。
BL21(DE3)菌株介紹：
特點：(1)T7 RNA 聚合酶基因的表達受控于λ 噬菌體DE3
區的lacUV5 啟動子，該區整合于BL21
的染色體上。
(2)適用于T7、T7
lac 啟動子的表達系統，如pET，pEASY。
(3) 適用于非毒性蛋白的表達。
(4) 使用pUC19
質粒DNA 檢測，轉化效率可達107 cfu/μg
DNA。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100
μl，可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態細胞為例。
2 向感受態細胞懸液中加入目的DNA（50
μl的感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置30分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置90秒，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2-3分鐘，該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入500
μl 無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養45分鐘（150轉/分鐘），目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5將離心管內容物混勻，吸取100
μl已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養12-16小時。
注：涂布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA總量較多，可取更少量轉化產物涂布平板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300
μl轉化產物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養板）
注意事項：
1. 感受態細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免感受態細胞的轉化效率。
2. 進行轉化操作時，應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。
3. 為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到最低。