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柱式動物總蛋白提取試劑盒（細胞樣品，變性提取） 

Column Animal Cells Denaturing Total Protein Extraction Kit Ver.740164

● 產品包裝：

● 產品簡介：

本試劑盒可從動物懸浮細胞或貼壁細胞中提取總蛋白，用變性裂解緩沖液配合離心柱裂解細胞，無需超聲處理打斷DNA，提取過程簡便高效，大約10分鐘即可完成蛋白提取，可以提取到細胞內的絕大多數蛋白質（包括膜，細胞器，核，核基質和胞質蛋白）。獲得的總蛋白可用于SDS-PAGE Western Blot檢測、免疫沉淀（IP）等后續研究。由于裂解緩沖液中含有SDS等強變性劑，不建議用于免疫共沉淀（Co-IP）、EMSA以及酶活性分析等與蛋白活性相關的實驗。

本產品提取的是細胞樣品的變性總蛋白，包括質膜，細胞器，細胞核，核基質和細胞質內的蛋白，提取的蛋白不適用非變性電泳。

按照每次使用~5×10⁶培養細胞加0.5 ml裂解緩沖液計算，本試劑盒大約可以使用50 次。

● 保存、效期及運輸：

按照標簽溫度貯存；有效期一年；試劑盒常溫運輸。

● 用前必讀：

1. 離心機請調整成RCF/g模式，按照離心力設置離心機（不要根據轉速rpm模式設置），需要離心機轉速能達到16000 g（約20000 rpm），所有離心步驟都需要在4℃低溫離心機中進行。

2. 變性裂解緩沖液混勻后放置于冰上。將離心柱套裝蓋好管蓋，放置于冰上預冷。

3. 蛋白提取推薦添加蛋白酶抑制劑（自備，試劑盒不提供），根據蛋白酶抑制劑母液濃度提前添加在裂解緩沖液中（添加時按照1:100添加，即1 ml裂解緩沖液 添加10 μl抑制劑）；研究蛋白磷酸化，需要添加磷酸酶抑制劑（自備，試劑盒不提供）。

4. 蛋白定量推薦使用BCA方法，可以選擇BCA蛋白濃度測定試劑盒（貨號：RTP7102）。

● 使用說明：

一. 準備即用型裂解緩沖液：

取適當體積的預冷裂解緩沖液，在使用前數分鐘內加入1/100體積的蛋白酶抑制劑（100×）（自備，試劑盒不提供），如果進行蛋白磷酸化研究，需要加入1/100體積的磷酸酶抑制劑

（100×）（自備，試劑盒不提供），隨后立即放于冰上待用。

二. 貼壁細胞蛋白提取：

2.1 將預冷的 1×PBS直接加入培養板，培養皿或培養瓶中清洗貼壁細胞，吸去上清。

2. 2 按照下表中將相應體積的變性裂解緩沖液均勻的加入整個器皿表面，用移液器吹打混勻，冰浴5分鐘。

注： (二百萬，2×10⁶)HeLa細胞，其細胞沉淀體積（PCV，Packed Cell Volume）大約為20 μl。

2. 3 將裂解的細胞轉移到預冷的離心柱中，4℃ 16000g 離心 1分鐘。

注：裂解中細胞會釋放出變性的核酸，呈團狀粘稠透明樣，如移液器不易吸取，可以將吸頭剪尖，保證將全部裂解物加到離心柱中。

2. 4 棄去離心柱，將收集管中蛋白溶液轉移至干凈的 1.5 ml 離心管中，即可用于蛋白濃度測定和后續實驗。注：如果收集管中有少許沉淀，只需收集上清即可。

三. 懸浮細胞蛋白提取：

3.1 400 g 4℃ 離心5 min收集細胞；用1 ml 1×PBS重懸細胞，400 g 4℃ 離心5 min收集細胞；重復漂洗細胞一次；留下細胞沉淀備用。

3.2 按照下表加入相應體積的變性裂解緩沖液，用移液器重懸，冰浴處理5分鐘。

注： (二百萬，2×10⁶)HeLa細胞，其細胞沉淀體積（PCV，Packed Cell Volume）大約為20 μl。

3. 3 將裂解的細胞轉移到預冷的離心柱中，4℃ 16000g 離心 1分鐘。

注：裂解中細胞會釋放出變性的核酸，呈團狀粘稠透明樣，如移液器不易吸取，可以將吸頭剪尖，保證將全部裂解物加到離心柱中。

3. 4 棄去離心柱，將收集管中蛋白溶液轉移至干凈的 1.5 ml 離心管中，即可用于蛋白濃度測定和后續實驗。注：如果收集管中有少許沉淀，只需收集上清即可。