細胞凋亡與壞死檢測試劑盒
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貨號
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名稱
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規格
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AH1060
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細胞凋亡與壞死檢測試劑盒
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100次
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● 產品組成：
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組分貨號
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名稱
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規格
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貯存
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AH1060-01
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細胞染色緩沖液
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100
ml
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4℃
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AH1060-02
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Hoechst
33342染色液
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0.5
ml
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-20℃
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AH1060-03
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PI染色液
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0.5
ml
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-20℃
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說明書
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一份
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● 產品簡介：
細胞凋亡與壞死檢測試劑盒(Apoptosis and Necrosis
Assay Kit)可以快速檢測細胞凋亡與細胞壞死。本試劑盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)雙染的方法。細胞發生凋亡時，染色質會固縮。Hoechst 33342可以穿透細胞膜，染色后凋亡細胞熒光會比正常細胞明顯增強。碘化丙啶(PI)不能穿透細胞膜，對于具有完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能染色。而對于壞死細胞，其細胞膜的完整性喪失，碘化丙啶(PI)可以染色壞死細胞。上述兩種染料雙染后，使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測時，正常細胞為弱紅色熒光＋弱藍色熒光，凋亡細胞為弱紅色熒光＋強藍色熒光，壞死細胞為強紅色熒光＋強藍色熒光。
按照每個樣品細胞數量100萬計算，該試劑盒可以使用100次。
● 貯存：
避光按照標簽溫度保存，一年有效。
● 操作步驟：
一. 貼壁細胞：
1.1在培養液中（細胞數量控制在106以內）均勻滴加適量的Hoechst 33342染色液和PI染色液，輕柔混勻。例如對于十二孔板中培養的貼壁細胞，每孔有1 ml的培養液，每孔需要加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl PI染色液。培養液中的血清、酚紅等都不會對染色產生干擾。
1.2混勻，37℃培養15分鐘，直接在顯微鏡下觀察；如果考慮到液體對拍照的乙酰個，可以吸除含染料的培養液，用染色緩沖液洗滌2-3次即可在熒光顯微鏡下觀察。
注：為避免凋亡細胞隨培養液或染色緩沖液被吸除，在吸除液體前，對于用多孔板中培養的細胞，最好用多孔板離心機離心一下以充分沉淀那些已經漂浮起來的凋亡細胞。
二. 懸浮細胞：
2.1 在懸浮細胞培養液中加入適量的Hoechst
33342染色液和PI染色液，輕柔混勻。例如對于十二孔板中培養的懸浮細胞，每孔有1 ml的培養液，每孔需要加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl PI染色液。培養液中的血清、酚紅等都不會對染色產生干擾。
2.2混勻，37℃培養15分鐘，將細胞轉移到1.5 ml離心管中，500 g 離心5分鐘收集細胞。
2.3細胞沉淀用細胞染色緩沖液洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床或手動晃動。
2.4細胞沉淀中加入100 μl 細胞染色緩沖液，重懸沉淀。
2.5取5 μl抗熒光淬滅封片液于載玻片上，加入等體積步驟2.4染色后細胞重懸液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
2.6 熒光顯微鏡下觀察。
注：熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。
實驗示例：
293 細胞Hoechst/PI雙染檢測
操作程序：293細胞胰酶消化后調整細胞密度為1×105/ml。接種到12孔板，1ml每孔，37度5%二氧化碳培養40小時，加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl 碘化丙啶染色液，37度培養15分鐘，熒光顯微鏡觀察（40×）。